ELISA Örneklerinin Eklenmesine İlişkin Adımların ve Konuların Analizi

İlk etapta ciddi hemolizden kaçınmak için özen gösterilmelidir. Hemoglobin, peroksitlere benzer aktiviteye sahip hem grubu içerir. Bu nedenle, etiketli enzim olarak HRP ile ELISA tayininde, serum örneğindeki hemoglobin konsantrasyonu yüksekse, renk için daha sonra eklenen HRP substratı ile reaksiyona girecek şekilde üreme sürecinde katı faza adsorbe etmek kolaydır. gelişme. Aseptik işlemle ayrılan serum numuneleri 2 ~ 8 ℃'de bir hafta saklanabilir ve bakteri varsa donmuş saklama önerilir. Numuneler uzun süre -70 ℃'nin altında tutulmalıdır. Numune toplama ve serum ayırma, bakteriyel kontaminasyondan mümkün olduğunca kaçınmaya dikkat etmelidir, bakteri üremesi, salgıladığı bazı enzimlerin antijenler, antikorlar ve diğer proteinlerin bozunma etkisi olabilir; Öte yandan, Escherichia coli'nin β-galaktosidazı gibi bazı bakteriyel endojen enzimlerin kendileri, karşılık gelen enzimle etiketlenmiş tahlil ile spesifik olmayan etkileşime neden olacaktır. Numunenin korunması sırasında bakteriyel kontaminasyonun neden olduğu bulanıklık veya topaklanma durumunda, santrifüjleme çökeltmesinden sonra tespit için süpernatant alınmalıdır. Elektrik kesintisi nedeniyle serum örneklerinin donma-çözülmesinden kaçınılmalıdır. Numunenin tekrarlanan donma-çözülme işlemiyle oluşturulan mekanik kesme kuvveti, numunedeki proteinleri ve diğer molekülleri yok ederek yanlış negatif sonuçlara neden olur. Ayrıca donma-çözülme örneklerinin karıştırılmasına da dikkat edilmeli ve şiddetli salınımlar yapılmamalıdır. Karıştırma tekrar tekrar tersine çevrilmelidir.

ELISA'da numune eklemek için genellikle üç adım vardır, yani enzim konjugatını ekleyin, substratı ekleyin. Donmuş serumun erimesinden sonra, protein lokal olarak konsantre edilir ve eşit olmayan bir şekilde dağıtılır. Tamamen karıştırılmalı, nazikçe ve kabarcıklardan kaçınılmalıdır. Baş aşağı karıştırılabilir ve mikserde kuvvetli salınım yapmaz. Plazma numunelerinin hazırlanması antikoagülanların yardımını gerektirirken, serum numuneleri ancak serumun doğal pıhtılaşması ve kan pıhtılarının büzülmesinden sonra alınabilir. Plaka deliğine seyreltici de eklenebilir ve daha sonra buna serum örneği eklenir ve daha sonra karışmasını sağlamak için bir mikro osilatörde 1 dakika çalkalanır. Genel olarak 5 gün içinde ölçülen serum numuneleri 4 °C'de saklanabilir ve bir haftadan fazla ölçülenlerin soğuk buzda saklanması gerekir. ELISA tayini için çok çeşitli numuneler kullanılabilir. Vücut sıvıları (serum gibi), salgılar (tükürük) ve dışkı (idrar, dışkı gibi) tümü, bazı antikor veya antijen bileşenlerini belirlemek için numune olarak kullanılabilir. ELISA kitinin bu testte ihtiyaç duyulmayan kısmı zamanında buzdolabında saklanmalıdır.